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2 Polyacrylamidgele

Sammelgel 5% (ml)

Trenngel 12,5% (ml)

O 2,020 0,480

0,75 M TRIS pH 8,8

3,750

0,625 M TRIS pH 6,8 0,660

30% Acrylamid 0,570 3,127

20% SDS 0,015 0,037

10% APS 0,030 0,075

TEMED 1:10 0,030 0,030

Den Harnstoffgelen, die für den Shift-Assay verwendet wurden, war Harnstoff als

zusätzliches Denaturierungsmittel zugefügt.

2 Polyacrylamidgele

mit Harnstoff

Sammelgel 5% (ml)

Trenngel 12,5% (ml)

1,687

0,667

1 M TRIS pH 8,8

2,813

0,625 M TRIS pH 6,8 0,660

10 M Harnstoff

0,333

0,750

30% Acrylamid 0,570

3,127

20% SDS 0,015 0,037

10% APS 0,030 0,075

TEMED 1:10 0,030 0,030

1.6 Proteinnachweis durch Immunoblot-Analyse (Westernblot)

Der Westernblot ist eine Methode zum Nachweis bestimmter Proteine mit Hilfe spezifischer

Antikörper. Nach dem Transfer der Proteine vom SDS-Gel auf eine PVDF-Membran (PVDF

= Polyvinylidendifluorid) werden nacheinander zwei Antikörper an die Proteine gekoppelt,

mit Hilfe derer die Proteine nachgewiesen werden können. Der Erstantikörper richtet sich

gegen das nachzuweisende Protein, während sich der Zweitantikörper gegen den

Erstantikörper richtet und eine Peroxidase aus Meerrettich trägt. Sie katalysiert die

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